【造模机制】以15%氯化钠配制的60%乙醇可以模拟高盐和乙醇对胃的刺激作用,并在用前加热至55℃可模拟高温食物对胃的刺激作用;脱氧胆酸钠可以模拟十二指肠液(内含胆汁)反流对胃的刺激作用。
【造模方法】Sprague Dawley大鼠,雄性,平均体重170g。脱氧胆酸钠需每次灌胃前新鲜配制,终浓度为20mmol/L。灌胃用60%乙醇是以15%氯化钠加无水乙醇配制而成,灌胃前恒温至55℃。实验周期共13周。直接法是将酶直接标记在第yi抗ti上,间接法是将酶标记在第二抗ti上,检测组织细胞内的特定抗原物质。实验~35天,大鼠自由饮用脱氧胆酸钠溶液,同时每隔5天以60%乙醇灌胃(10ml/kg)一次,第36~91天,每3天交替饮用脱氧胆酸钠或15%乙醇,同时每隔7天以60%乙醇灌胃一次。造模期间,配合使用饥饱失常法,即:~56天,饱食2天,禁食1天;第57~91天,饱食2天,禁食禁水1天。13周后,模型组大鼠体重比对照组明显下降,胃黏膜厚度明显减小。大体病理可见胃黏膜皱襞变平甚至消失,黏膜血管暴露、黏膜呈颗粒或结节状,组织病理可见黏膜内炎性细胞聚集、腺体明显减少,排列不整,黏膜厚度明显减小。
病理实验外包,病理染色常见染色介绍Von Kossa染色:简介:钙结节的形成为成骨细胞特有,Von kossa染色法是染色矿化结节的经典方法,利用与钙盐的复分解反应形成可被还原的银盐,在强光或紫外光下或者强还原剂作用下使其还原为黑色的金属银。【造模机制】以15%氯化钠配制的60%乙醇可以模拟高盐和乙醇对胃的刺激作用,并在用前加热至55℃可模拟高温食物对胃的刺激作用。
简要流程:石蜡切片/细胞爬片/冷冻切片→脱蜡至水→滴染→素染核→伊红染色→脱水、透明、封片(中性树胶)→Von kossa染(钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色,细胞核呈蓝色,背景呈红色;或者钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色,背景呈红色)。Von Kossa染色利用金属离子置换反应检测组织中钙盐沉积,由溶液中的银离子置换组织中沉积的钙离子。使用Image-pro-plus图像分析软件对切片拍摄的照片比较累积光密度(IOD)值比肉眼观测更jing确。
该染色可用于血管钙化的检测
病理实验外包,病理染色组织样本保存液多聚甲醛的配置:4%多聚甲醛固定液(4% Paraformaldehyde Fix Solution, 4% PFA Fix Solution)是一种广泛用于组化
(Immunohistochemistry, IHC)、荧光(Immunofluorescence, IF)、细胞化学(Immunocytochemistry, IC)、流式分析(Fluorescence-activated cell sorting, FACS)等检测时组织、组织切片、细胞等生物样品固定的溶液。织学上,4%的多聚甲醛穿透力强,固定均匀,能使组织硬化,有利于切片。面对着色深浅不一的组化切片用肉眼观察的结果只能是定性的,不准确的。该固定剂造成的组织收缩少,损伤小,较为温和,能很好的保存固有物质,保持组织的抗原性和细微结构。此外,多聚甲醛可用于固定并保存脂肪及脂类物质。南京英瀚斯,病理染色实验服务平台。
病理实验外包,病理染色多聚甲醛保存组织的注意事项:
多聚甲醛放置过久其中的醛基可能会被氧化为酸,使溶液pH降低,从而影响染色。
不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
多聚甲醛虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过24小时。
多聚甲醛可长期存在于固定过的细胞或组织样品中,固定完成后用适当的洗涤液或水冲洗数小时仍会有残留,因此后续实验结果如果受醛基影响,须尽量洗去残留的多聚甲醛。
醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响组化结果。南京英瀚斯生物科技有限公司的团队实体组建于2013年,前期以“东极生物”运营医学科研外包业务,是南京国有资产监督参股的,专注于医学科研外包服务的国家高新技术企业。因此,4%多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行染色等后续操作。
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