由于尚未形成主流技术,生物芯片的形式非常多,以基质材料分,有尼龙膜、玻璃片、塑料、硅胶晶片、微型磁珠等;以所检测的生物信号种类分,有核酸、蛋白质、生物组织碎片甚至完整的;按工作原理分类,有杂交型、合成型、连接型、亲和识别型等。由于生物芯片概念是随着人类基因组的发展一起建立起来的,所以至今为止生物信号平行分析成功的形式是以一种尼龙膜为基质的“cDNA阵列”,用于检测生物样品中基因表达谱的改变。折叠
主要原因是,合成反应每步产率比较低,不到 95% 。而通常固相合成反应每步的产率在 99% 以上。因此,探针的长度受到了限制。而且由于每步去保护不很,致使杂交信号比较模糊,信噪比降低。为此有人将光引导合成技术与半异体工业所用的光敏抗蚀技术相结合,以酸作为去保护剂,使每步产率增加到 98% 。原因是光敏抗蚀剂的解离对照度的依赖是非线性的,当照度达到特定的阈值以上保护剂就会解离。所以,该方法同时也解决了由于蔽光膜透光孔间距离缩小而基因芯片引起的光衍射问题,有效地提高了聚合点阵的密度。另据报导 ,利用波长更短的物质波如电子射线去除保护可使点阵密度达到 1010/cm2 。
1. 数据可靠分析
因为用基因芯片进行杂交分析,每次实验结果都会有些变化,因为包括靶DNA浓度、探针浓度、杂交双方的序列组成、盐浓度以及温度等许多因素影响了杂合双链的形成和稳定性。因此,需要进行重复试验以确保数据的准确。主要的方法是通过两次平行杂交反应,将每个基因在两个反应中的表达水平做成对应散点图,只要绝大多数基因的杂交结果都在45度斜线附近,就说明实验结果是可的。
为了提高dna分子的稳定性,通常将dna固定在固态基质表面。dna的共价固定在pcr、分子检测等领域拥有广泛的应用,现有技术中,常用共价固定dna分子的技术主要包括利用肽键的方式、利用各种硅烷偶联剂的方式、利用巯基的方式等,常用于dna固定化的固态基质有金刚石、金属、金属氧化物、陶瓷、塑料等,上述材料拥有良好的物理性能,然而由于上述材料多孔结构的制备较为复杂,所以通常dna是直接固定在材料的外表面上。
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