药xiao学实验-减肥功能的动物试验评价方法
1 测试项目
1.1 原理
这种方法是用高热量食物诱导动物肥胖，然后给试验样品（肥胖模型），或者同时给高热量食物给试验样品（肥胖预防模型），观察其变化动物体重和体脂含量。
1.2 肥胖模型法
SPF级雄性大鼠，体重180-220g，8-12只/组。在屏障系统下，给大鼠喂养维持饲料并观察5-7天。按体重随机分为两组，10只给予维持饲料作为空白对照组，60只给予高热量模型饲料。每周记录喂食量、洒食量、剩食量，称体重1次。喂养2周后，将给予高热量饲料的60只大鼠按体重增加进行排序，剔除1/3体重增加较低的抗肥胖大鼠。选取40只肥胖敏感大鼠给予高热量饲料6周，空白对照组同时给予维持饲料。
一、主要试剂材料
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)（Solarbio，G0170）
DMEM（Hyclone，SH30023）
FBS（Hyclone，SH30070.03）
青链mei素（Hyclone，SV30010）
胰酶（Hyclone，SH30042.01）
PBS（南京生兴，SN331）
CO2培养箱（Thermo fisher，3131）
Confocal荧光显微镜（Zeiss，LSM710）
二、实验方案
1、MG63及其耐药株培养在含10%胎牛xue清的DMEM完全培养基中培养，培养在37℃含5%CO2的细胞培养箱中培养，当细胞增殖至80%-90%时，用胰酶将细胞消化下来，按照1:3比例传代。
2、将1×106个细胞种在3.5cm玻璃底培养皿中，将细胞放入培养箱中培养过夜后，分别加入miR-22、cisp1atin、cisp1atin和miR-22后，将细胞放入培养箱中培养12h、24h。3、将细胞从培养箱中取出，去除培养基，用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞1次，弃上清。4、加入适量MDC Stain，轻轻混匀。5、室温避光染色15～45min。6、用300～400μl的1×Wash buffer清洗细胞2次，弃上清。7、加入100μl的Collection buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。8、荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，拍照。
膀guang炎：
大部分情况下，膀guang炎由细菌感ran所致，膀胱感ran可能引起疼痛并令人烦恼。如果感ran扩散至shen脏，可能发展为严重的健康问题。
膀guang炎还可能作为对某些yao物或放she疗法的反应出现。某些因素有时会刺激膀胱，例如卫生产品、sha精凝胶或长期使用导管，这也可能引发膀guang炎。膀guang炎还可能作为另一种疾病的并fa症出现。
实验材料
C57BL/6小鼠
1-2x108cfu/ml大肠杆jun悬液
24G留置针
注she器
10%水合氯醛
方法步骤1、小鼠称量体重后按照重量使用10%水合氯醛进行ma醉。
2、ma醉后的小鼠用胶布固定于板上
3、触摸小鼠下腹部，摸到鼓包时确定小鼠膀胱所在位置，轻柔按压膀胱，排空尿液。
4、使用碘酊消毒niao道口，使用合适的留置针润滑后从niao道外口插入膀胱。
5、成功后缓慢注入50微升大肠gan菌悬液，留置针可保留至小鼠su醒前，防止漏液6、注射完成后，小鼠放回笼中，等待自然su醒，正常饲养。实验案例
给药24小时后，形态学可见大量炎性细胞浸润
组织水肿，膀胱上皮脱落。