每批试剂需做验证检验：向一份100mL无菌水样中接种含有粪大肠菌的质控样标准菌株，按照上述定量检测步骤操作观察结果，看结果是否在其范围内。
9 注意事项
9.1 如果水样品有背景颜色，需做一个空白试验，与标准检测结果相比较。
9.2 只可使用灭菌水，不含缓冲液的水，不含氧化剂的水进行样品稀释。
9.3 此法所用试剂只用于常规水样，不可用于浓缩水样。
9.4 如水样中含有过多的氯，则加入试剂可能显蓝光，则该水样不可用此方法。
9.5 此法无需在无菌室中进行，但操作过程因避免微生物污染。
9.6 检测使用过的定量盘应灭菌后弃去。把约30个定量盘放入防爆袋中，用绳子松松的扎住袋口，放入高压蒸汽灭菌锅中，121℃高压灭菌20min后取出，在防爆袋上注明“生物垃圾已灭菌”方可弃去。
该检测方法是普遍采用的检测方法,相比我准的检测方法,如多管发酵及滤膜法具简便快捷，其选择性培养基具有抑制杂菌的作用，假阳性低
酶底物法为GB5750-2006收录的用于大肠检测标准方法，酶底物法是目前水中大肠检测的方法，目前以其方便快捷，假阳性低，适用大量样品快速检测等优点正逐步被国内检测所认可。
相对于多管发酵和滤膜法，酶底物法检测步骤大大减少，而且对实验环境要求不高，检测时间可减少到24小时，在日常水样监测及应急监测中具有很好的应用前景，可及时检测，预防，较大限度的减少重大公共安全事故的发生几率。
检测原理：
该检测方法采用大肠产生β-半乳糖苷酶分解色源底物-onPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)使培养液呈黄色。大肠埃希氏菌产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4 - methyl-umbelliferyl-β-glucuronide）使培养液在波长366 nm 紫外光下产生荧光的原理,来定性定量水中总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌。
酶底物法检测工作原理酶底物法使用ONPG和MUG两种营养生长指示剂，其中ONPG试剂在36℃的培养基中会被总大肠菌群产生的特异性β-半乳糖苷酶分解代谢，使水样从无色变为黄色，在44.5℃的培养基中会被粪大肠菌群(耐热大肠菌群)产生的特异性β-半乳糖苷酶分解代谢，使水样从无色变为黄色，MUG试剂在36℃的培养基中会被大肠埃希氏菌产生的特异性β-葡糖醛酸酶分解代谢，使水样在紫外灯下发出荧光，从而实现水质大肠菌群的检测。